Endotoxine und Pyrogene – Grundlagen, Eigenschaften, Wirkung
- Definition Pyrogene - Bakterielle Endotoxine
- Struktur und Funktion von LPS
- Aktivitäten von LPS in vivo: Fieber/Sepsis
- Endotoxin Schwellenwertdosis
Endotoxin und Pyrogentest im Arzneibuch und weitere regulatorische Anforderungen
- Was ist Pyrogenität, warum messen wir nur Endotoxin?
- Rechtliche, wirtschaftliche und ethische Aspekte
- Die EU-Direktive 2010/63/EU
- Fallbeispiele MAT, rFC
- Ph. Eur., USP, JP, FDA
- Anforderungen an die Methodenvalidierung
Fallstudien mit verschiedenen Produktmatrizes und Möglichkeiten zur Reduktion der Testinterferenzen mittels spezifischer Probenvorbereitungstechniken
- LAL-Reaktion und Störfaktoren
- Probenvorbereitungstechniken zur Beseitigung von Störfaktoren
- Fallbeispiele (Säuren, Laugen, Komplexbildner)
- Falsch-positive Ergebnisse durch ß-1,3-Glucane/Peptide Proteine
- Einsatz von Detergenzien
- Prüfung von zweiwertigen Ionen / Detergenzien / Komplexbildnern mittels Ultrafiltration
- Extraktion von Endotoxinen aus öligen Substanzen
- Behördenvorgaben
- Falsch-negative Ergebnisse
Depyrogenisierung
- Gründe für die Depyrogenisierung/Endotoxin Limits/Wieviel Reduktion ist notwendig
- Regulative Vorgaben
- Methoden und Anwendung
- Effektivität der Methoden
- Validierung
Low Endotoxin Recovery: Maskierung und Demaskierung
- Struktur und Aktivität von Endotoxin
- Endotoxin-Maskierung - Ein kinetisch kontrollierter Prozess
- Allgemeiner Reaktionsmechanismus
- Beeinflussung von Reaktionskinetiken
- Theoretische Überlegung zur Demaskierung
- Praktische Lösungsansätze: Komponenten zur Demaskierung von Endotoxin
- Fallbeispiel: Demaskierung von Endotoxin in einem biopharmazeutischen Produkt
Hold Times and More
- Planung und Implementierung von Hold-Time Studies
- Interpretation von Hold-Time Studies
Die Auswirkungen der Endotoxin-Maskierung auf die Entfernung von Endotoxin während der Herstellung eines biopharmazeutischen Arzneimittels
- Antikörper Aufreinigungsprozess
- Endotoxin-Abreicherung während der Arzneimittelherstellung
- Aufbau einer Endotoxin-Abreicherungsstudie
- Einfluss der Endotoxin-Maskierung auf den Herstellprozess
Erfahrung mit der Lagerfähigkeit/Stabilität des Kontrollstandards Endotoxin (KSE)“
- Was sind Endotoxin Kontrollstandards?
- Zweck und Durchführung Stabilitätsstudie
- Ergebnisse und Schlussfolgerung
Automatisierte, effiziente Testung auf Endotoxine in „Real Time“
- Überblick über Kartuschentechnologie
- Ein Ansatz zur Automatisierung
- Erhöhte Effizienz durch Geschwindigkeit und Genauigkeit
Standardisierung der BET-Assay-Ergebnisse – Automatisierung des BET-Assays unter Verwendung eines rekombinanten Kaskadenreagenzes
- Ein Blick auf die Vorteile des rekombinanten Kaskadenreagenzes PyroSmart NextGen® in Kombination mit der Pipettierautomatisierung durch Andrew+, einen mittelgroßen, vollautomatischen Pipettierroboter:
- Ein einfacher Übergang von manuellen zu fehlerfreien, robotergestützten Arbeitsabläufen eliminiert die Benutzerfehler und Variabilität zwischen den Tests.
- Verwendung eines charakterisierten Reagenzes sichert konsistente Test-zu-Test, Charge-zu-Charge und Labor-zu-Labor Ergebnisse.
- Signifikante Verbesserungen im QC-Labor.
Die Bedeutung von Data Integrity bei der Endotoxinprüfung
- Grundlagen und Unternehmensstrategien
- Einführung kinetische Testung
- Data Integrity Komponenten bei WinKQCLTM Endotoxin- Detektions und Analyse-Software
- Etablierung eines risikobasierten Ansatzes für den Process Review beim Audit Trail
- Q&A
Alternative Testmethoden – MAT und RFc
- MAT Entwicklungen im Arzneibuch
- MAT Methoden A/B/C
- Pros and Cons und Einsatz in der Routine
- RFc in den Pharmakopöen
Generische Methode und spezifische Produktvalidierung des Monozyten-Aktivierungstests
- Ersetzung des RPT durch MAT
- Generische Methodenvalidierung
- Produktspezifische Verifizierungen in Kombination mit einer generischen Methodenvalidierung
Strategie zur Methodenvalidierung für Endotoxintests von Wasserproben mit rekombinantem Faktor C unter Beachtung des 3R-Prinzips für den Tierschutz
- Um Tierversuche zu vermeiden und einen Beitrag zu Nachhaltigkeitsinitiativen zu leisten, wurde rekombinanter Faktor C (rFC) für Endotoxin-Tests in monoklonalen Antikörpern und Wasserprobenmatrices evaluiert. Vergleichstests sowohl mit dem LAL- als auch mit dem rFC-Assay zeigten einen geeigneten Endotoxinnachweis und unterstützen die Einführung von rFC als Endotoxin-Testmethode.
- Die Strategie zur Methodenvalidierung bietet einen Überblick und eine Begründung für das Design der experimentellen Studie gemäß den Leitlinien in USP <1225> und Ph. Eur. 2.6.32. Der Überblick über die Strategie der Methodenvalidierung umfasst die Bewertung der folgenden Parameter: Hemmung und Verstärkung, Genauigkeit, Präzision, Spezifität, Linearität, Bereich und Bestimmungsgrenze, Robustheit, Eignung der Methode und Vergleichbarkeit.
- Das Hindernis für die Einführung der Technologie in der Industrie liegt in den Validierungsanforderungen für eine alternative Methode.
- Der Nutzen dieser Präsentation besteht darin, die Strategie der Methodenvalidierung für rFC für Endotoxin-Tests in Übereinstimmung mit den EU- und US-Vorschriften zu vermitteln. Dabei wird auch erörtert, welche Aspekte der Parameter für die Methodenvalidierung anhand von Stichprobentests oder anhand von Argumenten aus der wissenschaftlichen Literatur bewertet werden sollten.